Подготовка материалов и оборудования для искусственного осеменения проводится в специально оборудованных помещениях, чтобы обеспечить идеальные условия и предотвратить повреждение или гибель сперматозоидов при контакте с ними.

Во время подготовки необходимо соблюдать следующие требования:

Чистота: Все инструменты, материалы и оборудование должны быть полностью чистыми перед использованием. Это важно для предотвращения проникновения бактерий или других контаминантов, которые могут повлиять на жизнеспособность сперматозоидов или вызвать инфекции у самок.

Сухость: Влага может негативно влиять на сперматозоиды, поэтому все используемые инструменты, материалы и оборудование должны быть полностью сухими перед использованием.

Стерильность: для исключения возможности инфекции используются стерильные растворы, материалы и инструменты. Это помогает сохранить здоровье самок и гарантировать, что процесс искусственного осеменения будет успешным.

Правильная подготовка обеспечивает оптимальные условия для максимально успешного и эффективного проведения искусственного осеменения, минимизируя риск повреждения или гибели сперматозоидов и обеспечивая высокую жизнеспособность спермы.

Приготовление физиологического раствора. Нужное количество дистиллированной воды отмеривают цилиндром и переливают в коническую колбу. На весах отвешивают химически чистый натрий хлорид из расчета 0,9 г на 100 мл воды и помещают в колбу с водой. Если натрия хлорид расфасован в таблетках по 0,9 г, то на каждые 100 мл воды берут одну таблетку. Колбу закрывают пергаментной бумагой, помешивают до полного растворения навески и подогревают до кипения. Вместо дистиллированной воды можно использовать воду очищенную, приготовленную путем фильтрования в бытовых очистителях водопроводной воды. Готовят раствор ежедневно. Применяют физиологический раствор для промывания внутренней поверхности инструмента для осеменения, обеззараженного 70%-ным спиртом (стеклянные шприцы-катетеры и микрошприцы), резинового катетера для осеменения кобыл после стерилизации кипячением, увлажнения влагалищного зеркала или стеклянного расширителя, а также при оценке качества спермы.

Приготовление 70%-ного спирта. Для приготовления 100 мл 70%-ного спирта в мерный цилиндр наливают дистиллированной воды 73 мл и добавляют до метки (27 мл) 96%-ного спирта этилового (спирта-ректификата). Расчет для приготовления спирта проводят по формуле: 

 Крепость приготовленного спирта контролируют спиртомером. Для этого размешивают стеклянной палочкой спирт с водой и медленно опускают в цилиндр спиртомер. После стабилизации положения прибора по шкале его определяют крепость спирта. Хранят спирт в баночке с притертой пробкой. Используют для обеззараживания внутренней поверхности стеклянного инструмента (шприцы-катетеры, микрошприцы), а также трубок из полимерных материалов, используемых при извлечении зародышей. После обеззараживания остатки спирта удаляют тщательным промыванием инструмента 0,9%-ным раствором NaCl.

Приготовление 2,9%-ного раствора натрия цитрата.

Для приготовления 2,9%-ного цитрата натрия берут мерный цилиндр или колбу на 100 мл, наливают туда 40-50 мл дистиллированной воды, вносят 2,9 г цитрата натрия и перемешивают до полного растворения. Затем, доливая дистиллированную воду, доводят количество раствора до 100 мл. Полученный раствор подогревают до 90-95°С и стерилизуют автоклавированием. Хранят в стерильных флаконах.

Применяют раствор для оттаивания спермы, замороженной в гранулах, при оценке качества свежеполученной и сохраняемой спермы и в качестве компонента желточно-цитратной среды для разбавления спермы быка.

Приготовление раствора фурацилина. Готовят 0,02%-ный раствор фурацилина на физрастворе. Дистиллированную воду подогревают до кипения, затем помещают навеску натрия хлорида (на 100 мл воды 0,9 г соли) и фурацилина из расчета 0,2 г на 1 л (20 мг на каждые 100 мл). Тщательно размешивают и переливают в стерильную бутыль из темного стекла. Хранят в течение двух–трех дней в затемненном месте. Применяют раствор для обработки искусственных вагин после использования, подмывания препуция у производителей перед получением спермы и наружных половых органов у коров и свиней перед осеменением.

Приготовление 1%-ного раствора гидрокарбоната натрия. В коническую колбу на 500 мл наливают дистиллированную воду и стерилизуют в течение 0,5–1 мин кипячением. Охлаждают проточной водой или дают остыть при комнатной температуре до 40–45°С. Затем отвешивают необходимое количество гидрокарбоната натрия из расчета 1 г на 100 мл воды. Навеску помещают в стерильную стеклянную колбу. Отмеривают стерильным цилиндром необходимое количество простерилизованной дистиллированной воды и переливают ее в колбу с навеской. Колбу закрывают стерильной пергаментной бумагой. Помешиванием добиваются растворения натрия гидрокарбоната. Нельзя нагревать раствор свыше 60°С, так как натрия гидрокарбонат разлагается и становится токсичным для сперматозоидов. 

Готовят раствор ежедневно. Используют при оценке качества спермы, для увлажнения влагалищного зеркала и промывания инструмента, обработанного 70%-ным спиртом.

Приготовление хромовой смеси. В коническую колбу отмеривают 1 л дистиллированной воды и растворяют в ней 60 г калия двухромовокислого, а затем осторожно добавляют малыми порциями 100 мл концентрированной серной кислоты. Приготовленной хромовой смесью обрабатывают сильно загрязненную стеклянную посуду. После тщательно промывают проточной водой, споласкивают дистиллированной водой и высушивают.

Приготовление раствора перекиси водорода. Для приготовления 10 л раствора в стеклянную бутыль, в кастрюлю или ведро наливают 8750 мл питьевой воды, добавляют 1200 мл перигидроли и 50 г моющего средства типа "Прогресс", "Сульфанол" или др. Раствор готовят непосредственно перед употреблением. Норма расхода дезинфицирующего раствора 70–100 мл на 1м2. 

Используют раствор для мытья полов, стен и мебели в боксах для работы с зародышами. Можно использовать этот раствор и при уборке манежа и чучел для получения спермы от производителей, а также помещения пункта искусственного осеменения.

Приготовление марлевых салфеток. Марлю складывают в несколько слоев и разрезают прямыми ножницами так, чтобы получить куски величиной от 20х20 до 40х40 см. Проглаживают утюгом и складывают вчетверо. Затем упаковывают в стерильную пергаментную бумагу. Салфетки используют для протирания оптики, предметных и покровных стекол, удаления капель воды с приборов и инструментов.

Для протирания половых губ самки перед осеменением после подмывания можно использовать одноразовые стерильные бумажные салфетки. Стерилизуют их в сушильном шкафу при температуре 130 оС в течение 1 ч.

Приготовление ватных тампонов. Пласты гигроскопической ваты расслаивают и отделяют тонкие кусочки. Края кусочков заворачивают так, чтобы они приобрели форму дисков диаметром 4–6 см. По мере приготовления тампоны складывают стопочкой и помещают в банку-тампонницу с притертой крышкой. Надавливая пинцетом в различных местах, хорошо пропитывают 96%-ным спиртом и закрывают банку. Можно тампоны сначала положить в чашку Петри, пропитать спиртом, отжать руками и затем пинцетом разделить их и поместить в тампонницу. 

Применяют спиртовые тампоны для дезинфекции искусственных вагин, стеклянных палочек и инструментов для осеменения самок, пинцетов и корнцангов, ножниц, термометров, подставок для инструментов, поверхности стола и рук и др.

Сухие ватные тампоны помещают в бумажные пакеты или в стеклянные банки, которые закрывают бумагой, и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 130 о С в течение 1,5 ч. Такие тампоны необходимы для удаления с приборов и инструментов остатков вазелина, слизи, спирта, физиологического раствора и др. 

Приготовление фильтров. В лаборатории фильтры можно приготовить из фильтровальной бумаги. Для этого ножницами разрезают бумагу на квадратные листы соответствующего воронке размера. Складывают лист по диагонали и разглаживают основание образовавшегося треугольника. Затем его еще раз складывают пополам и разглаживают сторону уже четырехслойного малого треугольника. Раздвигают один слой бумаги и вкладывают фильтр в стеклянную воронку так, чтобы после обрезания ножницами выступающих краев бумаги он полностью помещался в воронке, а края его на несколько мм были ниже края ее.

Фильтры бумажные используются для приготовления очищенной воды, фильтрования раствора натрия цитрата перед стерилизацией, а также красителей, применяемых при оценке качества спермы. При наличии стандартных стерильных фильтров используют их. Воронку с фильтром помещают в горловину колбы и осторожно порциями выливают на фильтр раствор или прокипяченную воду. При этом не следует переливать жидкость выше края фильтра.

Фильтрование позволяет удалить механические примеси и обеспечивает чистоту и прозрачность раствора

Кипячением обеззараживают: металлический инструмент и влагалищные зеркала; резиновые трубки, пробки и катетеры для осеменения кобыл; иглы и шприцы для многократного пользования; стеклянные банки и склянки, расширители влагалища и шприцы-катетеры. Стерилизация проводится в хирургических электрических, а также простых стерилизаторах и специальных стерилизаторах для искусственных вагин. Металлический инструмент (ножницы, пинцеты и корнцанги, шприцы для осеменения, расширитель шейки матки, подставки для инструментов и др.) и влагалищные зеркала кипятят в дистиллированной или очищенной воде в течение 15–20 мин. Чтобы они не покрывались ржавчиной, их нужно опускать сразу в кипящую воду, а режущий и колющий инструмент (скальпели, ножницы, иглы и пр.), кроме того, обертывают марлей для предохранения от затупления. Добавление к воде 1–2% соды усиливает стерилизующий эффект и также предохраняет инструмент от ржавчины. Шприцы для инъекций, различного типа переходники для соединения полимерных трубок, шприцы-катетеры и другие стеклянные предметы (банки, склянки и мелкая посуда) кипятят 30 мин в дистиллированной или очищенной воде без добавления щелочей. Их кладут в воду до начала подогревания, чтобы не лопались, причем шприцы разбирают и обертывают марлей. В шприцах-катетерах поршни индивидуально притерты к цилиндру и менять их нельзя. Поэтому при обертывании марлей к каждому шприцу прикрепляют и поршень. После этого их помещают на сетку стерилизатора, прикрытую марлей, и заливают теплой дистиллированной или очищенной водой. Стерилизатор накрывают крышкой, нагревают воду до кипения и кипятят 15–20 мин. После кипячения инструмент и посуду вместе с сеткой извлекают из воды, кладут на крышку стерилизатора и высушивают, с горячей поверхности вода быстро испаряется. Инструмент, непосредственно контактирующий со спермой, необходимо сразу же встряхнуть, чтобы удалить из него воду, а оставшиеся капли удаляют обеззараженными марлевыми салфетками или сухими стерильными ватными тампонами. Из шприцев-катетеров воду удаляют вставленными поршнями, завертывают их в стерильную пергаментную бумагу, трехслойные марлевые салфетки или фольгу и хранят в шкафу. Собирая шприцы для инъекций и шприцы-катетеры, поршень вставляют в цилиндр лишь после остывания. Пользуются при этом стерильным пинцетом. Резиновые пробки помещают в чистые марлевые мешочки и кипятят в течение 20–25 мин отдельно от металлического инструмента. Затем мешочки с пробками извлекают из воды и сушат в сушильном шкафу при температуре не выше 60℃. На искусственные вагины перед кипячением (а также автоклавированием) с обоих концов закрепляют чехлы (колпаки) из холста или плотной белой ткани. После этого вагину помещают в специальный или большой хирургический стерилизатор и кипятят в течение 20 мин. После кипячения быстро извлекают из воды и некоторое время удерживают в вертикальном положении, чтобы полностью удалить воду, и кладут на подставку. Чехлы снимают непосредственно перед подготовкой к получению спермы. Если обнаружены на стенке камеры остатки воды, ее удаляют спиртовыми тампонами.

Этим способом наиболее удобно стерилизовать стеклянную посуду, приборы и инструмент. Стерилизация проводится в электрических сушильных шкафах различных типов. Эксплуатация их осуществляется в соответствии с инструкцией по использованию. В рабочей камере сушильного шкафа температура может достигать 250–350℃. Перед стерилизацией разобранные шприцы-катетеры, мерные и пастеровские пипетки, часовые стекла и чашки Петри, а также мелкую посуду заворачивают в фильтровальную (пергаментную) бумагу или пищевую алюминиевую фольгу. При этом с банок снимают притертые крышки. Мензурки и мерные цилиндры большого объема закрывают колпаками из пергаментной бумаги или пищевой алюминиевой фольги, а колбы – ватно-марлевыми пробками. Подготовленные предметы размещают на полках сушильного шкафа, нагревают его до температуры 160–180℃ и выдерживают в течение 45–60 мин. Затем шкаф выключают и после охлаждения по мере необходимости берут инструмент и посуду для использования.

Надежным способом стерилизации спецодежды (полотенца, халаты, шапочки и косынки, фартуки, марлевые салфетки, вата), растворов, лабораторной посуды и инструмента является стерилизация паром под давлением – автоклавирование. Этот метод основан на том, что при кипении воды в герметически замкнутом приборе (автоклаве) повышается давление и температура пара. При этом температура кипения воды и давление находятся в определенной зависимости: при давлении 1, 1,2, 1,4 и 1,6 атм. температура кипения воды соответственно равна 99,1℃, 104,2℃, 108,7℃ и 112,7℃. Высокая температура губительно действует на микроорганизмы и их споры. Инструмент, спецодежду, марлевые салфетки, вату упаковывают в биксы. Растворы и лабораторную посуду можно размещать непосредственно в стерилизационной камере. Горловину колб закрывают пергаментной бумагой. 

Шприцы-катетеры (микро-шприцы) для осеменения коров и овец можно обеззараживать путем промывания внутренней поверхности 70%-ным спиртом с последующим тщательным (5–6 раз) промыванием физиологическим раствором, 1%-ным раствором натрия гидрокарбоната или 2,9%-ным раствором натрия цитрата. Катетеры для извлечения зародышей из латексной резины полностью погружают в 96%-ный или 70%-ный спирт, а затем промывают средой Дюльбекко. Наружную поверхность стеклянного инструмента для осеменения самок, а также сухие стеклянные палочки, химические термометры, пластмассовые подставки, эбонитовые палочки для смазывания искусственных вагин вазелином, пинцеты, ножницы, скальпели и другое обеззараживают путем протирания тампонами, пропитанными 96%- ным спиртом. Отработанные спиртовые тампоны складывают в специальную баночку или тампонницу и используют затем для фламбирования инструментов. Спиртом обеззараживают также отогретые вымытые сосуды Дьюара. Сухие внутренние стенки их протирают тампонами, пропитанными 96%-ным спиртом-ректификатом.

Допускается дезинфекция инструментов путем тща­тельного протирания 96 % -ным спиртом с последующим обмыванием их стерильным свежеприготовленным 1 %­ным раствором хлористого натрия. Шприц в полевых ус­ловиях можно тщательно отмыть от спермы 1 % -ным ра­створом хлористого натрия, затем набрать не менее 3 раз 70 % -ный спирт и удалить его путем промывания 5-6 раз 1 % -ным стерильным раствором хлористого натрия.

Фламбированием стерилизуют (непосредственно перед употреблением) на пунктах искусственного осеменения чисто вымытые и сухие влагалищные зеркала, стеклянные спермоприемники, 100-граммовые широкогорлые банки, стеклянные палочки, ножницы, пинцеты, подставки для инструментов. Этот способ применяется чаще в полевых условиях. Для стерилизации инструмент проводят несколько раз над некоптящим пламенем горящего спиртового тампона, пропитанного 96%-ным спиртом-ректификатом, спиртовки, паяльной лампы или газовой горелки. При этом стерилизуемые предметы постоянно поворачивают, медленно проводя через верхнюю часть языка пламени, где температура наиболее высокая, и обжигают (но не прокаливают) со всех сторон, чтобы была обеззаражена вся поверхность. Стеклянные предметы фламбируют осторожно: вначале обжигают над пламенем огня на расстоянии 15–20 см, а затем приближают к нему, равномерно обрабатывая со всех сторон. Чтобы огонь не обжигал руки, легкие стеклянные приборы и инструменты удерживают над пламенем пинцетом.

Этот способ в практике искусственного осеменения используется крайне редко. Стерилизация проводится в аппарате Коха или при помощи парообразователя и только для обеззараживания внутренней поверхности стеклянных банок и колб, инструмента для искусственного осеменения свиней (вагины, спермоприемники, ампулы, зонды). В парообразователь наливают на 3/4 воду, закрывают его крышкой и нагревают до кипения на электроплитке или газовой плите. Образующийся пар поступает в резиновую трубку, присоединенную к патрубку крышки. Струю пара, выходящего из трубки, направляют на обеззараживаемый инструмент. По мере выкипания воды ее подливают в колбу через воронку, разжав зажим на резиновой трубке. Продолжительность обеззараживания различных предметов (инструментов) неодинаково и зависит от их размеров, внешней температуры и силы струи пара. Обеззараживание проводят обычно в течение 3– 5 мин с того момента, когда пар начинает выходить из обеззараживаемого прибора (пар вначале конденсируется на холодных стенках инструментов). Обработанные паром инструменты нужно промывать стерильным 1%-ным раствором бикарбоната натрия или 2,9%-ным раствором лимоннокислого натрия, чтобы удалить с них оставшиеся капельки воды, которые могут неблагоприятно отразиться на качестве спермы. 

Белый или желтый вазелин используют для смазывания внутренней поверхности камер искусственных вагин, стилетов катетеров для извлечения зародышей, наружной поверхности ветвей влагалищного зеркала, рук или перчаток при вагинальном исследовании. В стеклянную банку с притертой пробкой вазелин накладывают не слишком полно. Плотно пробкой не закрывают, чтобы во время стерилизации она не прикипела к горловине или не лопнула банка; обычно пробку помещают в наклонном положении. На дно электрической водяной бани или кастрюли кладут сложенную в несколько слоев марлю (полотно, вату) и ставят на нее банку с вазелином. В баню (кастрюлю) наливают холодную или теплую воду так, чтобы уровень ее был несколько выше уровня вазелина в банке. Электрическую баню включают в сеть, а кастрюлю ставят на электрическую или газовую плиту. После начала кипения воды и расплавления вазелина обеззараживание его продолжают 20–30 мин. После этого банку извлекают из водяной бани и дают остыть, после чего плотно закрывают пробкой. Если после расплавления вазелина на дне банки появляется осадок, верхний (чистый) слой вазелина переливают в другую банку и стерилизуют заново. Стерилизация вазелина должна проводиться ежедневно.